Le palais des Offices, édifié par Vasari, devient un musée lorsque François Ier de Médicis y réunit ses collections. Leurs enrichissement est dû aux acquisitions des familles de Médicis puis de Lorraine, léguées à la cité toscane.
S'ils accueillent d'importants artistes étrangers, comme Van der Weyden, Van der Goes, Memling, Rubens et Rembrandt, les Offices sont surtout riches en chefs-d’œuvre de l'art italien. Les Écoles de Florence et de Sienne des XIIIème et XIVème siècles sont représentées par les Maestà de Cimabue, Duccio, Giotto et par l'Annonciation de Simone Martini. Le Quattrocento toscan s'illustre par l'Adoration des Mages de Gentile da Fabriano, Sainte Anne, la Vierge, l'Enfant et les anges de Masaccio et Masolino, un des panneaux de La Bataille de San Romano de Paolo Uccello, le Diptyque du duc d'Urbino de Piero della Francesca et , enfin, les oeuvres majeures de Botticelli ( dont La Naissance de Vénus et le Printemps ), plusieurs tableaux de Léonard de Vinci, Pollaiuolo, Signorelli. Parmi les oeuvres du XVIème siècle, outre les médaillons de Michel-Ange et les portraits de Madone des Raphaël, La Madone des Harpies d'Andrea del Sarto et les oeuvres de maniéristes toscans comme Pontormo et Bronzino sont remarquables. Signalons La Madone au long cou de Parmesan, La Vierge du Peuple de Barocci, les oeuvres de Mantegna, Véronèse, Titien, Tintoret, Caravage et les toiles du XVIIIème siècle de Crespi, Piazzetta, Tiepolo.